如何確定 HPLC 中的死體積？

對于HPLC來說，該如何計算死體積呢。

死體積(dead volume,V0)——由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測器流動池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分：進(jìn)樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙（被流動相占據(jù)，Vm）、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程，其它3部分只起峰擴(kuò)展作用。為防止峰擴(kuò)展，這3部分體積應(yīng)盡量減小。

死時間(dead time,t0)——不保留組分的保留時間。即流動相（溶劑）通過色譜柱的時間。

測量系統(tǒng)死體積通常需要通過實驗進(jìn)行測量，常用方法是通過進(jìn)一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液（方法中會有規(guī)定，例如：尿嘧啶，少量NaNO3或甲醇溶于流動相得到的溶液，也有直接用100％色譜純甲醇進(jìn)樣的情形）時，就會得到一個色譜峰，由此峰可以測得死時間（t0），這就是t0的實測結(jié)果。

然后通過計算得到系統(tǒng)死體積:

死體積（V₀) = 死時間t₀×流動相的流速F。